Wenn sich die Emissionsspektren jedoch überlappen, kann die Fluoreszenz von mehr als einem Fluorochrom detektiert werden. Um diese spektrale Überlappung zu korrigieren, wird ein Prozess der Fluoreszenzkompensation verwendet. Dadurch wird sichergestellt, dass die in einem bestimmten Detektor detektierte Fluoreszenz von dem gemessenen Fluorochrom stammt.
Warum brauchen wir eine Kompensation in der Durchflusszytometrie?
Für ein Durchflusszytometrie-Experiment ist eine Entschädigung erforderlich aufgrund der Physik der Fluoreszenz. Ein Fluorochrom wird angeregt und emittiert ein Photon in einem Bereich von Wellenlängen. Einige dieser Photonen werden in einen zweiten Detektor geleitet, wodurch einzelne gefärbte Proben doppelt positiv erscheinen.
Was ist der Hauptzweck der Verwendung einer Ausgleichszelle?
Der Hauptzweck besteht darin, die Messung der wahren Fluoreszenz im primären Kanal zu ermöglichen, der durch das Spillover von benachbarten Fluorophoren kontaminiert ist. Daher korrigiert die Kompensation das „Überschreiten“der Fluoreszenz zwischen Fluorophoren. Es ist jedoch nicht perfekt und kann nicht alle unerwünschten Effekte beheben.
Was ist eine Vergütungsmatrix?
Eine Kompensationsmatrix wird unter Verwendung von einfarbigen Fluoreszenzkontrolldateien berechnet, die auf dem ImageStream oder FlowSight mit allen erfassten Kanälen und ohne Hellfeldbeleuchtung oder SSC erfasst werden.
Was ist Spektralkompensation?
Spektral verwendenKompensation bedeutet, dass Signale von nicht primären Detektoren weiterhin verwendet werden, um das wahre Signal von Markern zu verstärken, wo dies möglich ist. Die primären Kontrollproben werden für die Parameterbenennung verwendet. … Proben, die für Primärdetektoren verwendet werden, helfen auch dabei, diese Parameter nach der Spektralkompensation zu benennen.
