2024 Autor: Elizabeth Oswald | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2024-01-13 00:02
Trypsinisierung ist der Prozess der Zelldissoziation unter Verwendung von Trypsin, einem proteolytischen Enzym, das Proteine abbaut, um anhaftende Zellen von dem Gefäß zu trennen, in dem sie kultiviert werden. Bei Zugabe zu einer Zellkultur baut Trypsin die Proteine ab, die es den Zellen ermöglichen, sich an das Gefäß anzuheften.
Warum trypsinieren wir Zellen?
Trypsinisierung wird oft durchgeführt, um die Passage der Zellen in einen neuen Behälter zu ermöglichen, Beobachtung für Experimente oder Verringerung des Konfluenzgrades in der Flasche durch Entfernen eines Prozentsatzes von die Zellen.
Wie löst Trypsin Zellen ab?
Trypsin/EDTA ist eine kombinierte Methode zum Ablösen von Zellen. Trypsin schneidet die Adhäsionsproteine in Zell-Zell- und Zell-Matrix-Wechselwirkungen, indem es die Aminosäure der Adhäsionsproteine spezifisch an Lysin oder Aginin am C-Terminus schneidet, wenn die vorgesch altete Aminosäure nicht Prolin ist.
Wie bekommt man trypsinierte adhärente Zellen?
Verfahren
- Medium durch Absaugen aus dem Kulturgefäß entfernen und Monolayer mit einer Salzlösung frei von Ca2+ und Mg waschen 2+ um alle Serumspuren zu entfernen. …
- Genügend Trypsin oder Trypsin/EDTA-Lösung in Kulturgefäß(e) geben, um die Zellmonoschicht vollständig zu bedecken, und für ~2 Minuten in einen Inkubator mit 37 °C stellen.
Wie deaktiviere ich Trypsin in Zellkulturen?
Sobald die Zellen getrennt erscheinen, fügen Sie 2 Bände hinzuvon vorgewärmten vollständigen Wachstumsmedien, umTrypsin zu inaktivieren. Dispergieren Sie das Medium vorsichtig, indem Sie es mehrmals über die Oberfläche der Zellschicht pipettieren, um sicherzustellen, dass >95 % der Zellen wiedergewonnen werden. Für serumfreie Kulturen Sojabohnen-Trypsin-Inhibitor (Produkt-Nr.
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